秀丽线虫油红O染色的实战心得与实验方案

发表于2025-12-16|更新于2025-12-16|湿实验相关

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前言

线虫油红O测定是做线虫脂质代谢研究中不能不品的一环，在这里分享一下自己做油红O染色的心得

实验材料准备

线虫（数量20-30条）
油红O染色试剂盒
M9缓冲液

步骤

油红0工作液的制备

根据样品数量及每个样品所需的染色工作液的体积，按油红0溶液与油红0稀释液 3:2 的比例配制油红 0染色工作液。然后用 0.45 微米的水系针头滤器过滤，两小时内使用。

实验过程

根据实验目的，培养大量所需时期的秀丽线虫;

洗涤: 将板上线虫挑至(冲洗)到离心管，用 M9缓冲液洗涤线虫 2-3次，自然沉淀

染色: 每个管中加入 200 μL油红0工作液，避光染色约1个晚上（个人比较喜欢晚上染色，第二天早上拿出来测定）

脱色: 首先使用试剂盒中的洗涤液冲洗，待自然沉淀后，使用含 0.01%(20ml加 2ul) Triton-X100 的 M9 缓冲液清洗3次，不要用离心机沉淀虫子，让其自然沉降(直至无色)，离心弃上清，最后一次剩一点的液体(液体越少越好)，冲洗到这种程度就差不多了

5、拍照:随后将离心管里剩下的液体和线虫全部转移至 2%琼脂糖胶垫上，即可拍照

琼脂胶垫一般个人是用枪头滴2滴在载玻片上，然后呈十字稍微压一下，目的是平摊琼脂胶垫

等到要测的时候，把上面的载玻片拿开，直接滴取线虫液在胶垫上，直接用显微镜观察

调整好视野后基本能看到染色后的虫子状态

注：如果拍照过程中虫子干了，可以往琼脂垫再加一点点的液体，让其重新湿润再拍照，不要在虫子干的状态下拍照，虫子干的时候拍摄会发现虫子周边会有黑圈，会极大阻碍油红O响应值的测定

秀丽隐杆线虫

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