记录于 2025-4-21
对现有的实验方案进行部分调整

LB 培养基

固体需加琼脂粉 15 g/L（250 mL 加 3.75 g）

配方（1L / 250 mL）	1L	250 mL
NaCl	5 g	1.25 g
胰蛋白胨	10 g	2.5 g
酵母提取粉	5 g	1.25 g

使用 1M NaOH 调 pH 7.5，121℃ 高压灭菌。

NGM 培养基（铝箔包装）

成分	1L	400 mL	100 mL
NaCl	3.0 g	1.2 g	0.3 g
细菌蛋白胨	2.5 g	1 g	0.25 g
琼脂粉	17 g	6.8 g	1.7 g
去离子水	975 mL	390 mL	97.5 mL

121℃ 高压灭菌，冷却至 55℃ 后加入：

添加剂	1L	400 mL	100 mL
胆固醇 (5 mg/mL)	1 mL	0.4 mL	0.1 mL
1 M CaCl₂	1 mL	0.4 mL	0.1 mL
1 M MgSO₄	1 mL	0.4 mL	0.1 mL
1 M KPO₄ 缓冲液	25 mL	10 mL	2.5 mL

CaCl₂（1M，111 g/L）

配方	1L	400 mL	200 mL
CaCl₂	111 g	44.4 g	22.2 g

121℃ 高压灭菌。

MgSO₄（1M）

配方	1L	200 mL	100 mL
MgSO₄	120 g	24 g	12 g
或 MgSO₄·7H₂O	246 g	49.2 g	24.6 g

121℃ 高压灭菌。

KPO₄ 缓冲液（1M）

配方	1L	400 mL	200 mL
K₂HPO₄·3H₂O	35.6 g	14.24 g	7.12 g
KH₂PO₄	108.3 g	43.32 g	21.66 g

用 1M NaOH 调 pH 6.0，121℃ 高压灭菌。

胆固醇溶液（5 mg/mL，乙醇）

⚠ 只能过滤除菌，不能高压灭菌！

配方	1L	200 mL	100 mL
胆固醇	5.0 g	1.0 g	0.5 g
无水乙醇	1L	200 mL	100 mL

0.22 μm 滤膜过滤除菌。

NaOH 溶液

1 M NaOH

配方	1L	250 mL	50 mL
NaOH	40 g	10 g	2 g
水	至体积	至体积	至体积

2 M NaOH

配方	1L	250 mL	50 mL
NaOH	80 g	20 g	4 g

M9 缓冲液（锡纸包）

配方	1L	400 mL
Na₂HPO₄·12H₂O	14.32 g	6.056 g
KH₂PO₄	3.0 g	1.2 g
NaCl	5.0 g	2 g
MgSO₄·7H₂O	0.1 g	—

121℃ 高压灭菌。

S 缓冲液

配方	1L	400 mL
0.05 M K₂HPO₄·3H₂O	129 mL（1.47 g）	51.6 mL（0.59 g）
0.05 M KH₂PO₄	871 mL（6.10 g）	348.4 mL（2.44 g）
NaCl	5.85 g	2.34 g

pH 调至 6.0，121℃ 高压灭菌。

甘油配置

配方	成分
30% 甘油（线虫）	甘油 30 mL + 水 70 mL
25% 甘油	甘油 25 mL + 水 75 mL
50% 甘油	甘油 50 mL + 水 50 mL

121℃ 高压灭菌。

次氯酸盐裂解液（或漂白液替代）

2M NaOH：2 mL
NaClO（6%）：2 mL
水：6 mL
总量 10 mL

SM 培养基（2 个板 ≈10 mL）

S 缓冲液：10 mL
微量金属溶液：0.1 mL
1M 柠檬酸钾：0.1 mL
乙醇胆固醇：0.01 mL
MgSO₄：0.03 mL
CaCl₂：0.03 mL

实验操作步骤

带 OP50 板子制备

配置 400 mL 培养基
用 90 mm 菌皿加入 1–2 mL 培养基，吹干，静置 12 小时
加入传代 8 h 的 OP50 液 200 μL
涂布并吹干
20℃ 培养 2–3 天形成菌苔

线虫同步化

方法一：裂解法

用 M9 冲洗线虫并转入离心管
1300 g / 2 min 离心
加裂解液涡旋 60 秒
观察虫体消失仅剩卵（总裂解 ≤10 min）
离心并用 M9 洗涤 ×2 次
将卵滴入 OP50 板，20℃ 培养

方法二：转板法

冲洗板面线虫（用于裂解法）
培养板残留卵 → 再冲洗一次并倒掉
板子吹干
20℃ 培养孵化
M1 期转入 OP50 板继续培养

两种方法可同时进行，以获得更多同步 L1 线虫。

高脂线虫造模（NGM）

在 100 mL NGM 中加入 2 g 葡萄糖（2%）